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PCR(Polymerase Chain Reaction)의 원리와 응용
중합효소 연쇄반응 PCR(Polymerase Chain Reaction)의 원리를 간략히 소개하고, PCR를 응용한 실험방법들에 대한 종류와 특징에 대해서 정리한 리포트입니다. 레포트 준비에 아무쪼록 활용이 되시길 빌며, 행복한 시간 되세요. 감사합니다.
1. PCR(Polymerase Chain Reaction)의 원리
2. PCR의 응용
1) RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction)
2) SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism)
3) RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)
4) ISPCR (In Situ Polymerase Chain Reaction)
5) DDRT-PCR (Differential Display Reverse Transcriptase PCR)
3. PCR이 이용되는 실험 중합효소 연쇄반응을 처음 고안해 낸 Kary Mullis가 이 방법의 발표 후 17년만인 지난 1992년 노벨 화학상 수상자로 선정되었는데, 선정 사유는 특정 DNA의 증폭 방법을 고안함으로써 과학발전의 획기적인 계기가 되었다는 것이었다. 이를 구체적으로 설명하자면 연구하고 싶은 유전자는 무엇이든 대량 생산이 가능하게 되었다고 할 수 있으며, PCR 방법을 응용하면 새로운 여러 가지 기술개발이 가능해졌다는 이야기가 된다. 새로 개발된 실험방법이 소개되는 Nucleic acid research와 같은 잡지에는 PCR을 응용한 새로운 실험방법이 매회 거의 빠짐없이 발표되고 있다. 많이 사용되는 방법 중에는 RT-PCR(reverse transcriptase PCR), SSCP(single strand conformation polymorphism), RACE (rapid amplification of cDNA ends), ISPCR(in situ PCR), DDRT-PCR(differential display reverse transcriptase PCR) 등이 있다.
1) RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction)
특정 부위의 RNA를 template로 하여 이에 상응하는 cDNA(complementary DNA)를 합성한 다음 이를 이용하여 PCR 증폭을 시행하는 기술이며, 실험과정은 1) 역전사효소(reverse transcriptase)를 이용하여 RNA로부터 cDNA를 제조하는 과정과 2) cDNA를 이용하여 특정부위를 증폭시키는 과정으로 나뉘어지며 (2) 과정은 genomic DNA로부터 특정 유전자 부위를 증폭시키는 방법과 같다. 이 방법은 Northern blot hybridization과 같은 방법을 통해 가능하던 RNA 분석보다 실험방법이 더욱 간단할 뿐 아니라 유전자의 염기서열 결정이 가능하기 때문에 주로 mRNA의 염기서열 및 전사량을 연구할 때 크게 도움이 된다.
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